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CRISPR/Cas9细胞敲除/入
CRISPR/Cas9 基因敲除技术

时间:2020-07-17 16:41:00 浏览:2825次


CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),即成簇规律间隔的短回文重复序列,是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制,广泛存在于众多原核生物基因中,其中II型为CRISPR/Cas免疫系统,依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。

Cas9蛋白是一种能够降解DNA分子的核酸酶(nuclease),其中含有两个酶切活性位点,每一个位点负责切割DNA双螺旋中的一条链。CRISPR在大约40%的细菌和90%的古细菌(archaea)的基因组中均有存在,它依赖crRNA (CRISPR RNA能够与tracrRNA配对,形成双链RNA结构,这种双链RNA分子能够介导Cas9核酸内切酶对与双链RNA分子互补结合的DNA序列进行切割) 和tracrRNA (trans-activating chimeric RNA, 即反式激活嵌合RNA,一种非编码RNA,能够促进 crRNA的形成,是Cas9蛋白发挥RNA介导的DNA切割作用必不可少的辅助因子)对外源DNA进行特异的识别,然后使用Cas9对外源DNA进行序列特异性地切割降解,从在细菌和古细菌细胞发挥了一种获得性免疫的作用。

CRISPR系统间区序列的多样性和特异性已被广泛应用于基因分型、流行病学研究、分析不同人体内的细菌菌群差异、检测环境中的噬菌体等科学研究。利用CRISPR系统作用机制的独特性用于构建噬菌体抗性的工业生产菌株。CRISPR系统还可能广泛应用于:作为遗传操作的工具,用于靶向基因沉默;rRNA-Cascade复合物可用于体外DNA、RNA分子的位点特异性切割;在临床上,通过限制质粒结合转移而控制药物抗性基因在致病菌之间扩散等。最近有多项研均表明,RNA介导的Cas9系统可以被用于对人类和小鼠细胞,以及细菌或斑马鱼胚胎进行基因组改造的工作当中( Martin et al. Science.2012;Mali P,Science.2013;Cong L,Science.2013)。

与其它基因组工程技术比较,CRISPR/Cas9技术拥有以下技术优势:

(1) 无物种限制,靶向精确性更高,可实现对靶基因多个位点同时敲除;

(2) 使用更方便,费用更低:Cas蛋白不具特异性,只需合成一个sgRNA就能实现对基因的特异性修饰。

(3) CRISPR/Cas9系统可避免超长、高度重复的TALENs编码载体带来的并发症。

威斯腾生物Cas9团队成立于2011年,目前拥有利用TALEN和CRISPR/Cas9技术完成细菌基因的敲除/敲入、细胞基因的敲除/敲入、动物个体(大小鼠、猪等模式动物)的基因敲除/敲入等先进技术手段,曾为全国各科研院所及中科院系统提供CRISPR/Cas9技术相关服务,完成40余例动物个体基因敲除。威斯腾生物战略合作平台——美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH),团队成员曾于Nature等国际一流科研杂志发表大量CRISPR/Cas9相关研究成果。威斯腾生物始终紧跟相关领域前沿技术,立志为国内所有科研人员提供最先进的技术服务以及产业化合作。

服务流程



威斯腾生物服务项目

分子生物学类 蛋白质与免疫学 动物实验
实时荧光定量PCR 单克隆抗体制备 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP) 多克隆抗体制备 抑郁症动物模型
ELISA(酶联免疫吸附法)技术 Western-blot 实验服务 脊髓损伤模型
生化指标检测 蛋白双向电泳实验服务 脑外损伤模型
双荧光素酶报告基因检测 原核蛋白表达纯化 骨神经损伤模型
染色质免疫共沉淀(ChIP) 真核蛋白表达纯化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白质组学 心力衰竭模型

SLAC蛋白组学 肺动脉高血压动物模型


高血压模型
病毒类 实验课题整体外包 粥样动脉硬化模型
过表达/干扰慢病毒包装纯化 整体课题外包 大脑中动脉阻塞模型
过表达/干扰腺病毒包装纯化 细胞整体实验外包 慢性之气管炎模型
逆转录病毒包装纯化 动物整体实验外包 过敏性哮喘模型
腺相关病毒包装纯化
肺炎大鼠模型


肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片 原代细胞培养 肝纤维化模型
细胞因子芯片 骨髓间充质干细胞培养 胆结石模型
生长因子芯片 脂肪干细胞培养 急性胰腺炎模型
信号通路磷酸化水平检测芯片 心肌成纤维细胞培养 急性肾衰竭模型
BioPlex悬浮芯片 软骨细胞培养 体内血栓模型
生长因子芯片 血管内皮细胞培养 关节炎模型
炎症因子芯片 神经元细胞培养 I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片 内皮组细胞原代培养 裸鼠成瘤
凋亡因子芯片
基因编辑动物
趋化因子芯片 电生理相关服务 动物整体实验服务
HuProt TM 20K人类蛋白组芯片 膜片钳实验
细胞生物学 高通量测序 代谢组学
细胞原代培养 mRNA测序 气相色谱GC/MS
MTT检测 LncRNA测序 液相色谱LC/MS
细胞凋亡检测 全基因组测序 核磁共震NMR
细胞周期检测 RNA-Seq测序
细胞克隆形成实验 外显子测序 影像学相关实验
Transwell细胞迁移/侵袭 16s扩增子测序 Micro-CT
流式分选 Small RNA测序 小动物活体成像
CCK8/XTT检测 宏基因组测序 核磁共振
台盼蓝检测细胞活性 单细胞测序 PET-CT
药物筛选细胞学实验 circleRNA测序
细胞粘附性检测 甲基化测序 基因编辑动物
细胞划痕实验
条件性敲除小鼠/大鼠
细胞生物学整体实验
全基因敲除小鼠/大鼠
细胞成管实验

病理类 CRISPR/Cas9细胞敲除/敲入 基因芯片
扫描电镜 基因定点突变细胞系 LncRNA芯片
透射电镜 单基因敲除细胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除细胞系 mRNA芯片
免疫组化 目的基因敲入细胞系 甲基化芯片(限人和小鼠来源样本)
Tunel(原位末端凋亡法)检测 报告基因敲入细胞系 SNP芯片(限人和小鼠来源样本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除细胞系
免疫荧光

Masson染色 CRISPR/Cas9动物敲除/敲入
原位杂交 基因敲除大鼠/小鼠
荧光原位杂交 基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色(PSA、茜素红、阿尔新蓝等)

行为学检测 药物筛选服务项目 药效学评价
水迷宫实验 高通量自动药物筛选平台 神经系统药物药效学评价
旷场实验 细胞高内涵药物筛选平台 抗肿瘤药物药效学评价
重复性刻板行为检测 蛋白质组学靶标研发平台 心血管系统药物药效学评价
动物跑台检测 分子药理研究平台 泌尿系统药物药效学评价
强迫游泳 生物膜片钳药物筛选平台 内分泌系统药物药效学评价

常规药物体外筛选 抗炎免疫药物药效学评价

【本平台合作项目】

分子生物学、细胞生物学、病理染色检测、细胞敲除&敲入、模式与转基因动物、SPF动物保种、免疫学检测、影像学检测、原代培养、细胞药筛、CRISPR/Cas9基因编辑、基因芯片、高通量测序、蛋白组学、代谢组学、高通量高内涵筛选、药效学评价、药理毒理学实验、慢病毒包装与稳转株建立、SiRNA与纳米载药、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

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